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人維生素K2(VK2)ELISA試劑盒說明書
點擊次數:776 發布時間:2016-12-14

  博研生物提供的“人維生素K2(VK2)ELISA試劑盒”,咨詢!!

詳細說明書可以添加客服索取!

 

人維生素K2(VK2)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:0.1 ng/mL -5 ng/mL
使用目的: 本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中維生素 K2(VK2)含。

實驗原理: 

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人維生素 K2(VK2)水平。用純化的人維生素 K2(VK2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入維生素 K2(VK2), 再與 HRP 標記的維生素 K2(VK2)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,過徹底洗 滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終 的黃色。顏色的深淺和樣品中的維生素 K2(VK2)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定 吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人維生素 K2(VK2)濃度。

試劑盒組成: 1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(8ng/mL) 0.5ml×1 瓶 3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份 5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個 標本要求 1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融 2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟: 1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。 4ng/mL 5 號標準品 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液 2ng/mL 4 號標準品 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 1ng/mL 3 號標準品 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 0.5ng/mL 2 號標準品 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 0.25ng/mL 1 號標準品 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,
然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡 不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。

6. 加酶:孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3。

8. 洗滌:操作同 5。

9. 顯色:孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 10 分鐘.

10. 終止:孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。 

計算:

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,
即為樣品的實際濃度。

注意事項: 

1.試劑盒從冷環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zui好 控制在 5 分鐘內,如標本數多,推薦使用排槍加樣。

4. 請次測定的同時做標準曲線,zui好做復孔。如標本中待測物質含過高(樣本 OD 值 大于標準品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

 

 

 

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