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大鼠核因子kb受體活化因子配體(RANKL)ELISA試劑盒供應商

點擊次數:1419 發布時間:2013/9/11
提 供 商: 上海研盟生物科技有限公司 資料大小:
圖片類型: 下載次數: 75
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大鼠核因子kb受體活化因子配體(RANKL)ELISA試劑盒供應商

 

使用目的:

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中核因子kb受體活化因子配體( RANKL含量
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠核因子kb受體活化因子配體( RANKL水平。用純化的大鼠核因子kb受體活化因子配體( RANKL抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入核因子kb受體活化因子配體( RANKL),再與HRP標記的核因子kb受體活化因子配體( RANKL抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核因子kb受體活化因子配體( RANKL呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠核因子kb受體活化因子配體( RANKL濃度。

 

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

800 pmol/L
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
400 pmol/L
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
200 pmol/L
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
100 pmol/L
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
50 pmol/L
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

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大鼠核因子kb受體活化因子配體(RANKL)ELISA試劑盒供應商

 

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