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大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒產品

點擊次數:1412 發布時間:2013/9/13
提 供 商: 上海研盟生物科技有限公司 資料大小:
圖片類型: 下載次數: 53
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大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒產品

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-水平。用純化的大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-再與HRP標記的肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-濃度。
試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
標準品(80μg/L)
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
9
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張 
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個

標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
3.組織處理:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒產品

操作步驟

1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

40μg/L
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
20μg/L
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
10μg/L
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
5μg/L
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.5μg/L
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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